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一、背景介紹
DNA和組蛋白通過調(diào)節(jié)親和性和功能來進行修飾，這些修飾的改變是腫瘤的標志之一。表觀遺傳治療致力于促進或維持惡性表型的DNA甲基化模式或組蛋白翻譯后修飾正常化。近年來，組蛋白的乙酰化修飾是表觀遺傳學領(lǐng)域的熱門研究方向。研究者發(fā)現(xiàn)，組蛋白乙?；桥c機體生理功能及病理表征聯(lián)系最為緊密的修飾化之一。HDACs和HATs 等去乙?；蛞阴；赴悬c是表觀遺傳抗腫瘤領(lǐng)域研究的熱門靶點，在相關(guān)藥物的臨床試驗中，組蛋白乙酰化水平的變化是藥物療效的一個重要指標。
圖1. 組蛋白乙?；叭ヒ阴；感揎椣嚓P(guān)酶分子簡介
二、流式檢測組蛋白乙?；幕驹?/strong>
一般認為，組蛋白乙?；揎椂鄶?shù)發(fā)生在組蛋白H3或H4N端特定的賴氨酸殘基上，目前市面上已有很多抗乙酰化組蛋白H3和H4直接標記的流式抗體。臨床相關(guān)的組蛋白乙酰化Marker有很多，如H3K9ac、H3K14ac和H4K5ac等，使用對應Marker的抗體進行標記，通過流式檢測某熒光素對應通道的信號值或信號比值（如H3K9ac/H3），來反映細胞組蛋白乙?；膹娙酢?/p>
三、關(guān)于模擬臨床樣品的設(shè)計考量
1.生物基質(zhì)的選擇
考慮到臨床分析，該檢測需采用全血或分離的PBMC進行。
圖2. 全血樣本白細胞中H3K9乙?；?/p>
2.不同水平組蛋白乙?；M臨床樣品的制備
在全血或PBMC體外加藥處理調(diào)節(jié)組蛋白乙?；磉_水平，生成高表達或低表達的模擬臨床樣品，處理不同時長后，獲取各個時間點的樣品進行流式細胞術(shù)檢測。
圖3. 西達本胺（HDACI）處理不同時長，
PBMC組蛋白乙?；降淖兓?/p>
圖4. 不同藥物（包含HDACI和HATI）
處理后H3K9ac水平的變化
四、關(guān)于方案設(shè)計要點的考量
1.儲存條件對組蛋白乙酰化水平的影響
據(jù)文獻報道，全血樣品可在臨床中心采集后盡量24h(建議不超過48h)內(nèi)于4°C運輸至檢測中心，盡快裂紅或裂紅固定，裂紅后的細胞盡快-80°C保存，裂紅固定后的細胞保存不超過一周，進行流式檢測分析，文獻結(jié)果如圖5。
該檢測可考慮熙寧生物自主產(chǎn)權(quán)的凍存全血的方法，無需裂紅，可直接凍存。
圖5. 患者給藥LBH589(HDACI)后，采集全血，裂紅固
定，流式細胞術(shù)檢測體內(nèi)白細胞組蛋白乙?；降淖兓?/p>
2.固定、破膜或破膜固定劑的選擇對染色效果的影響
由于不同的固定、破膜或破膜固定劑的成分可能會影響抗體的結(jié)合以及導致熒光素分子降解，從而影響信號強度，甚至檢測不到陽性信號，因此需要選擇合適的固定、破膜或破膜固定劑。
圖6. 固定破膜試劑基本信息匯總
五、熙寧優(yōu)勢
蛋白的磷酸化、甲基化、乙酰化、ADP-核糖化修飾和泛素化等共價修飾的變化是細胞生理狀態(tài)，機體健康狀態(tài)，藥物是否發(fā)揮藥效的重要指標。在藥物臨床研究階段，檢測蛋白翻譯后修飾水平，評估給藥前后的變化情況，成為臨床階段一些小分子藥物的主要藥效學（PD）指標之一，可用于指導創(chuàng)新藥物二期臨床試驗的用藥劑量。
熙寧生物流式細胞轉(zhuǎn)化醫(yī)學團隊，具有10余年藥物開發(fā)和生物標志物檢測經(jīng)驗，并成功開發(fā)了超100種不同的生物標志物方法，用于臨床階段藥物安全性和有效性的評估，其中包括一系列基于流式平臺、ELISA和MSD平臺的磷酸化蛋白、甲基化蛋白、ADP-核糖化修飾、泛素化和乙酰化蛋白的檢測方法，助力藥物臨床研究。歡迎各位新老朋友，前來探討您感興趣的靶點和檢測方法。
參考文獻
1.Bates, Susan E. "Epigenetic therapies for cancer." New England Journal of Medicine 383.7 (2020): 650-663.
2.Watson, Maria, et al. "The study of epigenetic mechanisms based on the analysis of histone modification patterns by flow cytoametry." Cytometry Part A 85.1 (2014): 78-87.
3.韓韋鈺, et al. "組蛋白去乙酰化修飾調(diào)控心血管疾病的發(fā)生與發(fā)展." 中國組織工程研究 27 (2023): 1-7.
4.Watson, Maria, and David Hedley. "Whole blood measurement of histone modifications linked to the epigenetic regulation of gene expression." Current Protocols in Cytometry 71.1 (2015): 6-36.
5.李建輝, et al. "流式細胞術(shù)檢測組蛋白乙?；椒椒ǖ慕⑴c應用." 遺傳 38.6 (2016): 581-587.
6.Glaser, Keith B., et al. "Gene expression profiling of multiple histone deacetylase (HDAC) inhibitors: defining a common gene set produced by HDAC inhibition in T24 and MDA carcinoma cell lines." Molecular cancer therapeutics 2.2 (2003): 151-163.
7.Rigby, Lin, et al. "Methods for the analysis of histone H3 and H4 acetylation in blood." Epigenetics 7.8 (2012): 875-882.
8.Obier, Nadine, and Albrecht M. Müller. "Chromatin flow cytometry identifies changes in epigenetic cell states." Cells Tissues Organs 191.3 (2010): 167-174.
